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質粒DNA的限制性內切酶酶切分析
簡介實驗目的學習和掌握限制性內切酶的特性掌握對重組質粒進行限制性內切酶酶切的原理和方法并理解限制性內切酶是DNA重組技術的關鍵工具。相關基礎知識限制性核酸內切酶
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簡并寡核苷酸誘變實驗（小段DNA序列中產生大量突變）
材料與儀器大腸桿菌DNA聚合酶 dNTP 甘油 NaCl EDTA SDS 無水乙醇水浴鍋 離心機 分光光度計步驟1. 設計寡核苷酸，其3‘端含有由8個核苷酸
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用 T7 噬菌體 DNA 聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
材料與儀器去離子蒸餾水 二硫蘇糖醇 dNTP 和 ddNTP 標記混合液和 ddNTP 延伸 終止混合液 甲酰胺上樣緩沖液 測序酶稀釋緩沖液 測序酶反應緩沖液含
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用 Taq DNA 聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
材料與儀器去離子蒸餾水 ddNTP dNTP 甲酰胺加樣緩沖液。酶和緩沖液。Taq 酶或類似的熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀釋緩沖液 核酸和寡核苷酸 寡核
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上樣并進行 DNA 測序實驗
材料與儀器緩沖液和溶液 0.5XTBE 和 或 1XTBE 凝膠 核酸和寡核苷酸自動微量加液器 牛頭夾 凝膠溫度監(jiān)測條 巴斯德吸管 帶塑料涂層的金屬板 穩(wěn)壓電源
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放射自顯影和從測序凝膠上讀取 DNA 序列實驗
材料與儀器步驟材料緩沖液和溶液貯存液、緩沖液和試劑的配方見附錄 1。將貯存液稀釋到合適的濃度。凝膠固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性
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寡核苷酸指導的單鏈 DNA 誘變實驗
材料與儀器適用于轉化的大腸桿菌菌株 用于轉化的大腸桿菌 TG1 感受態(tài)菌ATP PE1緩沖液 PE2 緩沖液 噬菌體 T4 DNA 連接酶 噬菌體 T4 多核苷
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以雙鏈 DNA 為模板的體外誘變：用 DpnⅠ選擇突變體實驗
材料與儀器帶 hsdR17 基因型的感受態(tài)大腸桿菌菌株ATP 含有四種 dNTF 的混合溶液 誘變緩沖液 NaOH NaAC TE 噬菌體 T4DNA 連接酶
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脂染介導的 DNA 轉染實驗
材料與儀器指數(shù)生長的哺乳動物細胞培養(yǎng)物脂染試劑 NaCl 枸櫞酸鈉 質粒 DNA 純化閉環(huán)質粒 DNA 細胞生長培養(yǎng)基試管 聚苯乙烯或聚丙烯試管 組織培養(yǎng)皿步驟
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磷酸鈣介導的質粒 DNA 轉染真核細胞實驗
材料與儀器指數(shù)生長的哺乳動物細胞CaCl2 氯喹 Giemsa 染液 甘油 HEPES 鹽緩沖液 甲醇 磷酸鹽緩沖液 丁酸鈉 TE 質粒 DNA 細胞生長培養(yǎng)基
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磷酸鈣介導的高分子量基因組 DNA 轉染細胞實驗
材料與儀器指數(shù)生長的哺乳動物細胞培養(yǎng)物CaCl2 甘油 HEPES 鹽緩沖液 異丙醇 NaCl 基因組 DNA 帶有選擇性標志的質粒 細胞生長培養(yǎng)基聚乙烯試管
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生物粒子介導的 DNA 轉染實驗
材料與儀器CaCl2 乙醇 甘油 亞精胺 質粒DNA 細胞生長培養(yǎng)基基因槍 金或鎢粒子 鏡頭紙 微量離心管 需轉染的細胞或組織步驟材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液
DNA 轉染實驗 生物粒子 -
λ噬菌體分離物的快速分析(從平板裂解物中純化λDNA)實驗
原理對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可
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DNA 酶 I 足跡法對 DNA 上的蛋白質結合位點作圖實驗
材料與儀器新鮮組織、培養(yǎng)的細胞、來自細胞或組織的蛋白成分細胞勻漿緩沖液 細胞重懸緩沖液 細胞淋洗緩沖液 乙醇 Ficoll 400 甲酰胺染色液 MgCl2 C
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DNA 結合蛋白的凝膠阻滯分析實驗
材料與儀器作為對照的核提取物或蛋白組分 核提取物或蛋白組分Ficoll 400 聚乙烯醇 蔗糖染色液 10X Tris-氨基乙酸或Tris-硼酸-EDTA(TB
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