DNA 提 取過 程 及原 理一 、實 驗原 理

從 細胞中分離得到的 DNA 是與蛋白質結合的 DNA, 其中 還含 有大世 RNA, 即核糖核

蛋白。如何有效地將這兩種核蛋白分開是技術的關鍵。

鹽溶法是提取 DNA 的常規技術之 一。在制備核酸時，通 常 是 用 研 磨 破 壞 細 胞 壁 和 細胞膜， 使核蛋白被釋放出來。利用 DNA 不溶千 0.14mol/L 的 NaCl 溶液而 RNA 能溶于

0.14mol/L 的 NaCl 溶液這一性質可以將 DNA 核蛋白和 RNA 核蛋白從樣品破碎細胞液中分開。

分 離 得 到 核 蛋 白 后 ，還需 進一步將蛋白等雜質 除 去。去 除蛋 白的方 法有 3 種： ＠ 用 含辛 醇 或 異 戊 醇 的 氯 仿 振 蕩 核 蛋 白 溶 液 ， 使其乳化， 然 后離心除 去變 性蛋 白質。用這種 方法處理時， 蛋白質停 留在水相和氯仿相中間， 而 DNA 則溶千上層水相， 用 兩倍 體積 95%乙醇溶液可將 DNA 鈉鹽沉淀出來。 用十二燒基硫酸鈉(SOS)等去污劑使蛋白質變性， 從而使其與核酸分離， 也可 從材料 中直接提取出 DNA。用苯酚處理， 然后離心分層， 一樣可以將 DNA 與蛋白質分 離開來。這時 DNA 溶于上層水相，蛋 白 變 性 后 則 停 留 在 酚層 內 ， 吸出上層水相， 加入兩倍體積的 95%乙醇即可得到白色纖維狀 DNA沉淀。反復  使用上述方法多次處理 DNA 核蛋白溶液 ，就能將蛋白等雜質較徹底 地除 去， 得到較純的 DNA 制品。本實驗采用 CTAB 法從植物幼苗中提取基因組 DNA。