Pull-down技術是通過以適當標簽和目的基因進行融合表達作為誘餌，從細胞提取物中釣出與目的蛋白相互作用的蛋白。多組分蛋白質復合物的分離主要利用固定在瓊脂糖樹脂的反標簽系統完成（表1）。                

1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉移酶（glutathione-transferase，GST）融合標簽從細菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白質相互作用研究領域里得到了極大的推廣。

GST pull-down技術原理

GST融合蛋白pull-down方法是將誘餌蛋白質和GST標簽融合表達，一步純化后與含有目的蛋白質的溶液進行孵育，利用谷胱甘肽-Sepharose將GST-融合蛋白-目的蛋白復合物沉淀下來，然后進行SDS-PAGE鑒定與誘餌蛋白質相互作用的蛋白質。一般來說，GST融合蛋白pull-down方法用于兩個方面：一是鑒定能與已知融合蛋白質相互作用的未知蛋白質；一是鑒定兩個已知蛋白質之間是否存在相互作用。該方法比較簡便，在蛋白質相互作用研究中有很廣泛的應用。

GST pull-down技術常見問題

GST pull-down技術在體外驗證蛋白間直接的相互作用時有較強的特異性，但也存在一定的局限性。GST pull-down技術不能用于大規模的蛋白間相互作用的篩查；內源性蛋白的干擾使實驗結果出現假陽性。因此要求在實驗中充分考慮可能對實驗結果造成影響的因素，以減少假陽性的出現。在進行GST-pulldown 實驗時應該考慮以下幾點。

1.高純度GST融合蛋白的獲得

高純度的融合蛋白能減少實驗結果的假陽性，因此獲得高純度的融合蛋白對于GST pull-down 實驗的結果分析具有重要的作用。同時，為了能最大程度地保證融合蛋白原有的生物學活性，一般傾向于可溶性融合蛋白。德泰生物提供哺乳動物細胞瞬時轉染服務，可在短期內獲得可溶性蛋白，通過基因序列優化，自主研發的高表達載體，結合豐富的細胞轉染經驗，蛋白表達產量可達毫克至克級別。

2. GST標簽對實驗結果的影響

雖然在大多數情況下認為GST標簽不會對下游蛋白的折疊和功能造成影響，但實際上GST標簽有可能會影響蛋白的正確折疊。因此對融合蛋白進行質量控制，會使實驗結果更加可信。例如對標簽蛋白用核磁共振的方法進行檢測，以確定其結構是否發生變化，或者是應用X射線晶體分析法檢測標簽蛋白結構上有無變化，再者就是結合其他的已知能發生相互作用的蛋白來對標簽蛋白進行功能上的驗證，以檢測其結構或功能是否發生了變化，這些方法均可提高結果的可信度。

3.DNA和RNA對實驗結果的影響

有研究在利用GST pull-down檢測蛋白間是否存在相互作用關系時，對陽性結果進一步探究發現，兩種蛋白均為DNA結合蛋白，兩者相互作用是兩種蛋白分別與DNA結合所致。因此，在做pull-down實驗時，可加入核酸酶來消除可能橋接到蛋白上的DNA和RNA，減少蛋白間相互作用出現的假陽性。

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