ESTs（Expressed Sequence tags）是從已建好的cDNA庫中隨機取出一個克隆，從5’末端或3’末端對插入的cDNA進行一輪單向自動測序，所獲得的約60-500bp的一段cDNA序列。 ESTs的產生：從特定的狀態的組織或細胞中分離mRNA，將mRNA逆轉錄成cDNA亞克隆到載體中，利用載體上的引物對插入片段測序測序出來的片段結果即稱為ESTs(expressed sequence tags)。

EST 的產生過程注定其具有以下特性： 1、由于是單次測序結果，序列的精確度較低，存在較多錯誤。(大約2% error，HGP 錯誤率標準是<0.01%)； 2、重復結果多，不同EST‘s t往往來自同一個基因； 3、大部分EST序列來IMAGE consortium IMAGE consortium的序列在Washington university的基因組測序中心測序，占GENEBANK中EST庫的大半，較為可靠。大部分dbEST都有IMAGE ID，描述其組織或細胞來源，測序情況。由于這些特性，導致目前EST面臨的最大問題是序列質量不高，存在： 1、缺失、替代、插入等變異（與mRNA相比）； 2、測序中的錯誤引發大約1.5%的利用oligoT產生的EST無法與已知的mRNA的3端比對上； 3、倒置（5端和3端弄反，插入克隆載體時出錯）； 4、嵌合EST（5端和3端來自不同mRNA）因此，在對EST做Blast時最好用BlastX和Tblastx。         了解了上述特點及問題后，有利于我們更好地應用ESTs。