幽門螺桿菌感染三種檢驗方法的比較
幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是近年認識的一類與胃炎、消化性潰瘍等疾病有關的微生物。眾所周知,胃炎和潰瘍屬于多發常見生物。眾所周知,胃炎和潰瘍屬于多發常見病,而Hp的生長需要特殊的微需氧環境,這在一些基層實驗室較難做到。為尋求簡單、廉價而又易行的 實驗方法 ,我們試圖用燭缸法對胃活檢標本中Hp的分離、鑒定并與尿素酶試驗和涂片鏡檢對比,報告如下。
1 對象和方法
1.1 對象
1990―04~1990―10內蒙古蒙醫學院附屬醫院做內鏡的所有患者,經內鏡檢查時均在胃竇部和球部和球部鉗取粘膜組織兩塊,放無菌小瓶內,于30min內送檢。
1.2 方法
①培養與涂片:標本采集后,立即接種于含有多粘膜素B、萬古霉素、兩性霉素B、玉米淀粉和藥用炭末的甲氧芐嘧啶(TMP)巧克力培養基中。標本接種后將組織塊在干凈玻片上反復涂抹作細菌涂片革蘭染鏡檢。②取另一塊組織放入40孔的酶標板孔中,每孔含尿素酶 試劑 100μl(0.1ml),用透明膠布封閉,置37℃溫箱,分別于1/6h,1/3h,1/2h,1/4h,12h記錄顏色出現變化。變為粉紅色者為陽性,無為化者為陰性。③生化及耐受試驗按幽門螺桿菌(Hp)生化鑒定常規進行。④藥敏試驗對其中30株培養的細菌按常規紙片法做藥敏試驗。
2 結果
本組資料計254例標本,其中直接涂片165例Hp陽性,陽性率為65.0%。在涂片上為優勢菌,革蘭陰性,菌體有1~2個彎曲,呈X形或螺旋形,易于識別。直接尿素酶試驗陽性者170份,陽性率66.9%,從時間上看10min陽性者占40.6%,30min占84.1%,4h為97.7%,12h即100%出現陽性。涂片鏡檢中Hp的數量愈多尿素酶試驗出現陽性所要時間則愈短。254例全部進行燭法Hp培養,結果有132例分離出Hp,陽性率為52.0%。該菌在TMP巧克力培養基中生長緩慢,3d~4d時菌落里呈圓點狀,直徑0.2mm~1mm,光滑,透明,無色有光澤、邊緣整齊。生化和耐受試驗見表2。本研究所分離出的Hp對痢特靈、四環素、青霉素、氨芐青霉素敏感,對TMP+SMZ,多粘菌素B和奈定酸抗藥。
三種檢驗方示比較 三種方法檢出Hp陽性者173例,陽性率為68.1%。尿素酶試驗與鏡檢結果無顯著性差異(P>0.05),二者符合率為95.3%。尿素酶試驗與培養檢出率差異有顯著性(P<0.01),二者符合率為77.6%,(表3,4)。
表1 直接尿素酶試驗結果
觀察時間(h)
1/6
1/3
1/2
1
2
4
12
24
總計
陽性例數
69
112
143
154
159
166
170
170
170/254
表2 Hp的生化特性
氧化酶
過氧化氫酶
尿素酶
馬尿酸水解
1%甘氨酸耐受
H 2 S產生紙條法
硝酸鹽還原
3.5%氯化鈉耐受
生長溫度
25℃
37℃
42℃
+
+
+
-
+
+
-
-
-
+
-
表3 尿素酶試驗與鏡檢和培養結果比較
鏡 檢
培 養
+
-
+
-
尿素酶試驗
+
162
8
132
38
-
3
81
0
84
P>0.05,尿素酶試驗與鏡檢X 2 =0.22;P<0.01,尿素酶試驗培養,X 2 =11.79。
表4 三種試驗方法比較
指標(%)
尿素酶試驗
鏡檢
培養
靈敏度
98.3
95.4
76.3
差異度
100.0
100.0
100.0
假陽性率
0.0
0.0
0.0
陰性率
1.7
4.7
23.7
陽性預測值
100.0
100.0
100.0
陰性預測值
96.4
91.0
66.4
調整一致性
98.7
96.6
85.7
3 討論
對254例病人的胃粘膜活標本進行
