PBS緩沖液怎么選?
大家好!今天我們來聊聊生物化學實驗中常用的PBS緩沖液。首先,PBS有多種類型,主要區別在于磷酸鹽濃度和是否含有鉀離子。以下是一些常見的PBS類型: 1PBS(
大家好!今天我們來聊聊生物化學實驗中常用的PBS緩沖液。
首先,PBS有多種類型,主要區別在于磷酸鹽濃度和是否含有鉀離子。以下是一些常見的PBS類型:
1×PBS (0.01M磷酸鹽,無菌):經過0.1 μm過濾除菌,適用于組織或細胞的洗滌、其他試劑的配制以及細胞實驗的稀釋液等。對于大部分客戶來說,0.01M磷酸鹽,無菌可以滿足使用要求。但是,如果需要較長時間孵育,0.0067M磷酸鹽,無菌 表現會更好一些。
PBS (0.0067M磷酸鹽,無菌):適用于一些生物化學研究,作為常用溶劑。對于少部分細胞,短時孵育的情況下,0.0067M磷酸鹽,無菌優于0.01M磷酸鹽,無菌。
PBS (0.01M磷酸鹽,不含鉀離子):可用于清洗樣本、配制試劑等,以及ELISA、WB、IHC、IF等免疫相關實驗中的漂洗操作。適用于一些對磷酸鹽濃度有特定要求且不需要鉀離子參與的實驗。
此外,對于大部分WB蛋白指標來說,PBST和TBST是可以通用的。但在檢測磷酸化蛋白時,PBST可能會有點小麻煩。一方面,磷酸鹽會干擾堿性磷酸酶結合的抗體,還會增加磷酸特異性抗體的背景信號(不過對HRP標記的抗體沒影響);另一方面,磷酸化特異性抗體可能會和PBST中的磷酸鹽結合,導致檢測到的信號降低。就像有時候抗體孵育緩沖液從TBST改成PBST,可能條帶就會變淺甚至消失(在其他條件都不變的情況下)。
因此,在選擇緩沖液時,大家要根據具體情況仔細考慮哦。
