Matrigel基質膠操作注意事項
細胞外基質是特殊的復合組成,可以穩定組織,促進細胞貼壁并通過與細胞外受體的相互作用調節細胞的功能。這一類ECM對于多種細胞的培養,功能,生長,以及細胞分化中都有重要的作用。Corning基質膠是從EHS小鼠肉瘤中分離得到的一類ECM,并被廣泛應用于基底膜的制備。基于基質膠的組成及特性,基質膠對于體外模擬細胞體內生長環境提供了非常重要的支持。
小TIPS:
Matrigel膠之前是BD旗下Biocoat產品線的注冊產品,幾年前BD將Biocoat產品線整體銷售給Corning公司,現在是Corning旗下Biocoat產品線的產品,所以我們常說的BD的基質膠和corning的基質膠其實是同一個產品。
使用Matrigel? Matrix注意事項及技巧
- 接觸 Corning? Matrigel? Matrix的所有容器、液體處理產品等必須要預冷。
- 在 >10°C的情況下Matrigel就可成膠將Matrigel放在冰上,在2-6°C冰箱中過夜融化盡量減少反復凍融的次數,將Matrigel分裝成小份備用。
- 在分裝Matrigel時,使用5-7次后更換槍頭,以保證無菌和避免堵塞槍頭在使用前將分裝的Matrigel儲藏在-20°C或-70°C- 產品要保存在非無霜冰箱中,不存放在冰箱門上,不存放在常開關的冰箱中。
- 不建議儲藏在 4°C。
Matrigel 稀釋注意事項
- 對于標準濃度的Corning Matrigel (~8-11mg/mL),使用預冷的無血清培養基或者PBS稀釋。
- 將Matrigel加入到冰冷的稀釋液中,輕輕混合- 禁止使用水稀釋-可能引發膠凝固高濃度基質膠:可將冰冷的培養基直接加入到冰凍的Matrigel瓶中稀釋
- 使用前在冰上完全融化 (24-48小時)- 使用或分裝前通過攪拌或者上下吸液混合將分裝的Matrigel在冰上融化;稀釋到目標濃度。為了均勻的包被,傾斜培養器皿,將吸有Matrigel 的槍頭置于升高的一邊表面;輕柔的加入Matrigel。如果需要,輕柔的振蕩容器以便更完全的包被表面 (注意:避免產生氣泡)包被嵌套小室:將Matrigel滴加在小室膜中央位置,用槍頭快速的將膠擴散,形成包被表面
- 注意:避免用槍頭損害小室的膜包被后將器皿放置至室溫或是在37℃保存30分鐘到1個小時后成膠- 使用前將Matrigel成膠后表面的液體移除
Matrigel? Matrix 其它建議
培養容器包被Matrigel? Matrix后可以儲存多久?
最好當天使用,也可選擇如下方式:- 包被后可在包被表面添加一層無血清培養基,在37度溫箱存放一周(薄膠和厚膠) 或者,包被后的器皿在表面添加無血清培養基存放在2-6oC (用石蠟膜封板并保證無菌狀態) (單薄膠)- 如果存放在2-6°C, 使用前需要預熱
Matrigel? Matrix稀釋后是否可以保存剩余的產品?
不建議保存稀釋后未用完的Corning? Matrigel? Matrix
為什么Matrigel ? Matrix如此粘稠?
Matrigel的粘稠度受下列因素的影響:- 蛋白濃度不同,粘度不同(批次差異),濃度越高粘度越大- 高濃度的產品粘稠度更高- 溫度變動。溫度越高,產品越粘稠是否所有的Matrigel ? Matrix產品都可以支撐hESC/hPS培養?
可以,但是Corning? Matrigel? hESC-Qualified Matrix (Cat. No. 354277) 能保證培養的一致性,重現性和可靠的性能
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