熒光抗體法診斷豬瘟
(一)材料與 試劑 1.豬瘟熒光抗體 由指定單位購買,按說明書稀釋使用。 2.0.01Mol/L pH7.2PBS液 3.緩沖甘油 優級純甘油9份和碳酸鹽緩沖液
(一)材料與 試劑 1.豬瘟熒光抗體 由指定單位購買,按說明書稀釋使用。 2.0.01Mol/L pH7.2PBS液 3.緩沖甘油 優級純甘油9份和碳酸鹽緩沖液1份混合而成。 4.碳酸鹽緩沖液: 0.5Mol/L 碳酸鈉 1份 0.5Mol/L 碳酸氫鈉 3份 混合即可。 5. 熒光顯微鏡 6.冰凍切片機 (二)操作方法 1.組織切片制作 取新鮮的扁桃體與腎組織塊,用冰凍切片機制成5μm~7μm原冰凍組織切片,粘于清潔的載玻片上(0.8 mm ~1.0mm),空氣中自然干燥后,立刻在室溫下放入純丙酮固定15min,取出后PBS液輕輕漂洗數次,自然干燥后染色。如不能及時染色,可用塑料紙包好,放入低溫冰箱中保存。 2.熒光抗體染色 滴加豬瘟熒光抗體(工作濃度)2~3滴,以覆蓋為度,放入濕盒中,37℃感作30min(切忌染色液干涸)。以PBS液3×3min沖洗。 3.染色片半干時,滴加緩沖甘油封片,置 熒光顯微鏡 下觀察。 4.對照的設置 將組織切片固定后,滴加豬瘟高免 血清 ,37℃感作30min,沖洗后,以豬瘟熒光 抗體 染色。 (三)結果判定 將染色好的組織片置激發光為藍紫光或紫外光的熒光顯微鏡下觀察。 陽性結果:扁桃體隱窩上皮細胞或腎曲小管上皮細胞的胞漿內呈明亮的翠綠色熒光,細胞形態清晰。 陰性結果:無熒光或熒光微弱,細胞形態不清晰。
