RNA沉淀方法
乙醇沉淀RNA通常RNA 可以像DNA 一樣沉淀。步驟1. 加入1/10 體積1 mol/L 的NaOAc (pH4. 8) 和2.5 倍體積冷的95 %的乙醇
乙醇沉淀RNA
通常RNA 可以像DNA 一樣沉淀。
步驟
1. 加入1/10 體積1 mol/L 的NaOAc (pH4. 8) 和2.5 倍體積冷的95 %的乙醇。
2.-20 ℃ 下沉淀過夜。
3. 用70 %的乙醇洗滌沉淀。
注意:當你處理少量RNA 的時候(低于5 μg) ,在RNA 沉淀之前加入一些載體或者共沉淀物,這類物質將幫助沉淀RNA, 更容易看見沉淀,兩種載體是糖原和酵母RNA 。
選擇性的RNA 沉淀
如果是DNA-RNA 的混合物(例如,在體外轉錄之后),可以將乙酸胺作為鹽用于單獨沉淀RNA 。
步驟
1. 加入5 mol/L 乙酸胺到RNA 中,終濃度為2.5 mol/L 。
2. 冰上放置15 min 。
3. 4°C 高速離心15 min 。
4. 移去上清,用70 %的乙醇洗滌沉淀。
5. 用適量不含RNase 的水或者緩沖液來重懸RNA 沉淀。
注意:由于乙酸胺會因失去氨基而降解(該基團將影響RNA) ,所以使用的溶液應該用純鹽來配制,而且應該放在冷的密封容器中,溶液通過過濾除菌存放在4°C 。
