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丁醇抽提法濃縮核酸

2025-01-08 DNA 加入收藏
用仲丁醇( 2 -丁醇)或正丁醇( 1 - 丁醇)等溶劑萃取水溶液時,部分水分子會進入有機相,而核酸依然留在水相。重復抽提幾次后可顯著減少核酸溶液的體積。這一濃

用仲丁醇( 2 -丁醇)或正丁醇( 1 - 丁醇)等溶劑萃取水溶液時,部分水分子會進入有機相,而核酸依然留在水相。重復抽提幾次后可顯著減少核酸溶液的體積。這一濃縮方法可用于減少稀溶液的體積,以使核酸易于通過乙醇沉淀得到回收。

試劑

DNA 樣品     異丁醇

方法

  1. 計算核酸溶液體積,在2 5 °C 下加入等量的異丙醇。輕微、充分混勻兩相。

  • 加入過多的異丙醇可能會導致除去所有水分并使核酸發生沉淀。如果發生這種情況,向有機相中加入水直到水相(其中包含核酸分子)再次形成。

  1. 室溫下,將溶液置于微量離心機中以最大轉速離心20s, 或者用臺式離心機在1600r/min 下離心。用微量移液器移去上清(異丙醇)

  2. 重復步驟1 和2 直到獲得想要的水相。

  • 因為異丙醇抽提液不能除去鹽分, 鹽的濃度會伴隨體積的減少而增加。核酸可以通過柱層析或者乙醇沉淀轉移到適當的緩沖液中。異丙醇在水中最大的溶解度為20℃溶解5% 、30 ℃溶解7.5% 。水在異丙醇中最大的溶解度為20℃溶解5 % 、30℃溶解17.3 % 。

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