首先要為大家介紹下質粒圖譜包含的四大要素

1、復制起點：控制著質粒的復制，并決定了質粒的宿主和拷貝數(shù)；

2、篩選標記：多為抗性基因，以便加以檢測篩選；

3、多克隆位點：外源基因的插入位點；

4、其他元件：如轉錄調控元件、翻譯表達元件和蛋白標簽等。

以下就用大家常用的pcDNA3.1(+)表達載體作為案例

第一步：了解質粒圖譜中的復制起點

如上圖譜中的ori表示質粒的復制起點。質粒的復制起點決定了質粒的宿主及質粒的拷貝數(shù)相關。若圖譜上只有一個ori，表示質粒是原核克隆及表達質粒。而圖譜上有兩個ori，則表示該質粒是穿梭質粒，既可以在原核也可以在真核中復制。

第二步：了解質粒圖譜中的篩選標記

圖譜中的AmpR、KanR等表示質粒載體中的篩選標簽，多為抗生素抗性基因，方便后續(xù)通過抗生素篩選陽性克隆。只存在單抗性的質粒多為原核克隆載體和原核表達載體。而存在兩種或以上的抗性的多為穿梭質粒。

第三步：了解質粒圖譜中的多克隆位點

圖譜中的MCS區(qū)或者許多內(nèi)切酶集中的部分，就是質粒的多克隆位點。多克隆位點為一系列限制性內(nèi)切酶酶切位點，是外源DNA的插入位點，一般可通過酶切后連接的方式將外源DNA插入質粒。多克隆位點一般位于轉錄啟動和轉錄終止信號之間。

第四步：了解質粒圖譜中其它元件

質粒載體中除復制起始位點、篩選標記、多克隆位點外，還具有其他一些表達或調控元件，如轉錄調控元件、翻譯調控元件和融合表達標簽蛋白等。比如：

蛋白純化標簽蛋白：His-Tag，GST-tag等

蛋白檢測標簽蛋白：Myc-Tag，F(xiàn)lag-Tag，HA-Taq等

熒光蛋白表達標簽：GFP，mCherry等