高效液相色譜( HPLC) 是以液體作為流動相，利用樣品各組分在流動相和固定相中分配系數(shù)或吸附系數(shù)的差異來實現(xiàn)不同組分分離的色譜分析技術(shù)。該技術(shù)具有實用、快速、靈敏、效率高等特點， 在醫(yī)藥、環(huán)保、石化、生命科學(xué)、食品工業(yè)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。然而，在HPLC實驗過程中常會出現(xiàn)各種各樣的問題，今天小編就給大家分享一下液相色譜分析常見的問題與相應(yīng)的解決方案。

1.保留時間漂移

關(guān)于漂移問題：

• 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定；

• 流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等；

• 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定；

• 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出；

• 流動相不合適，解決辦法為改換流動相。

保留時間漂移

Fisher chemical溶劑一直是賽默飛化學(xué)品中的熱賣產(chǎn)品，覆蓋了實驗室分析檢測的主要項目。

• 亞微米級過濾：雜質(zhì)含量低

• 高純度：背景噪音低

• 穩(wěn)定性：良好批次穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)重現(xiàn)性

• 惰性氣體填充：水分含量低

2.色譜柱柱壓過高

柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，可以按如下步驟進行檢查。

• 拆去保護預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查第二步；

• 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查第三步；

• 將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用于使用過的柱子。

• 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。

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3.色譜峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰

篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子；

• 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子；

• 色譜柱柱超載，減少進樣量。

拖尾峰

4.結(jié)果重現(xiàn)性差

盡管過去幾年來，填料的制造技術(shù)有了極大的提高，但不同的廠商的C18柱填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時間就可能不同。在流動相中加入少量競爭物，如三乙基胺（TEA），將會使硅醇基的成鍵能力飽和，從而能保證不同牌號柱子上的相對保留時間具有較好的重現(xiàn)性。

5.梯度洗脫中柱溫的變化

許多色譜工作者在操作液相色譜時，色譜柱是在室溫環(huán)境下工作的。如果實驗室的溫度能保持不變的話，不會有什么大問題。但大多數(shù)的工作環(huán)境溫度是不斷變化的，因此若想將在某實驗室開發(fā)的一種液相色譜方法應(yīng)用到其他實驗室的話，溫度的差別就會引起較復(fù)雜的問題。

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